益生菌可在動物胃腸道內生長繁殖，當達到足夠的量時，可調節胃腸道菌群平衡，刺激酶活性，提高抗病性增強動物生長免疫系統，有益于宿主的健康。近年來，益生菌因具有改善動物的生長性能，免疫力和抗病性等益生作用，成為抗生素的替代品，可以預防抗生素和藥物的副作用。乳酸菌和酵母菌被廣泛應用于飼料行業，在生產養殖方面起重要作用。

1. 酵母菌

1.1 酵母菌發酵飼料的作用

酵母菌作為酶、游離核苷酸、B族維生素和氨基酸的豐富來源，被廣泛應用于飼料行業。酵母菌具有平衡瘤胃微生物區系、減少甲烷等有害氣體的產生、穩定瘤胃pH值、促進動物的生長發育、改善機體的消化機能等益生作用。酵母菌在發酵飼料時一方面通過自身繁殖來增加飼料原料中的營養物質含量，另一方面自身產生的酶通過一系列酶解反應將飼料原料中大分子物質降解為可直接吸收利用的小分子營養物質，進而提高飼料利用率。酵母菌在發酵過程中產生酒香味或蘋果芳香味，增加飼料風味和動物采食量，提高飼料的營養價值和保健等功能。酵母菌發酵時產生的乳酸、乙酸、丙酸等降低飼料pH值，抑制病原菌的生長，提高發酵飼料營養價值。酵母菌發酵飼料時產生抑制病原菌的細菌素，破壞病原菌黏附性的酶類物質，抑制革蘭氏陰性菌生長的過氧化氫等。酵母菌發酵過程中通過提高飼料原料中的植酸磷和無機磷酸鹽的降解速率來提高日糧消化率。此外，酵母菌在發酵飼料過程中吸收飼料表面氧氣，提高其他益生性微生物在飼料表面的黏附性；產生硫胺素，促進厭氧真菌生長繁殖，增加纖維降解菌的數量，提高飼料中纖維的降解率。酵母菌在均衡營養和平衡胃腸道微生物區系兩方面都有積極影響，在反芻動物添加劑領域有非常大的發展空間和潛力。然而，酵母菌的作用效果與各酵母菌菌種生理結構的不同及生物活性的不同密切相關，通過育種和優化方法可篩選生產優質蛋白的益生酵母菌株。

1.2 酵母菌發酵飼料的應用

酵母菌可利用農業副產品進行發酵，改善適口性及動物胃腸道菌群平衡，提高飼料消化吸收率，增強機體免疫功能，促進畜牧業發展。酵母菌以玉米皮為發酵底物時將纖維物質轉化為具有高營養價值的蛋白，提高發酵底物營養價值。酵母菌以玉米、豆粕及麩皮為發酵底物時可顯著提高發酵原料的粗蛋白、氨基酸和總磷含量，提高發酵飼料營養價值。酵母菌發酵可提高玉米秸稈中粗蛋白和粗脂肪含量。酵母菌發酵可減少棉籽粕中的棉酚等抗營養成分，產朊假絲酵母發酵玉米時可對黃曲霉毒素進行生物脫毒，提高飼料營養價值，可改善動物畜產品品質，有利于人類健康。生產上用釀酒酵母和熱帶假絲酵母發酵玉米等底物時酵母不僅自身大量增殖蛋白含量，同時其發酵底物的蛋白含量相應提高，可飼性隨之增加，成為魚粉等動物源性蛋白質飼料的替代品之一，降低飼料成本。馬克思克魯維酵母發酵48h可有效降低發酵底物的植酸含量，可能是因為酵母菌發酵通過產植酸酶有效降低植物源飼料中的植酸含量，提高飼料營養價值，有益于動物的消化吸收。

在水產動物中的研究表明，蝦喜食飼料酵母，且飼料酵母中的抗病因子和耐高溫特性對蝦生存于惡劣環境和提高存活率有重要意義。保苗期幼參采食酵母菌發酵的飼料時其增重率明顯提高，有益于其生理健康。反芻動物的體外試驗結果表明，動物采食酵母菌發酵的飼料可有效提高瘤胃內總菌數、氨態氮、菌體蛋白和揮發性脂肪酸含量，進而提高飼料利用率和動物消化吸收率。酵母是一種天然存在于谷物上的生物控制酵母，可在氣密存儲系統中有效抑制霉菌和腸桿菌科細菌不良生物的生長。但也有研究表明，啤酒酵母發酵的高纖維飼糧對后備牛的營養效果不顯著，發酵飼料在反芻動物中的應用效果有待進一步研究。此外，酵母菌對動物機體有提高消化吸收、增強免疫機能、改善生長性能、維持胃腸道菌群平衡等方面也有重要意義。Pinloche等研究表明，益生性酵母菌發酵飼料可改善奶牛瘤胃環境，加快溶解纖維蛋白等益生性作用。Suvarna等分離的酵母菌株無溶血性，可在動物腸道內黏附定植。育肥豬飼用釀酒酵母可極顯著提高空腸絨毛高度和隱窩深度值。仔豬食用活釀酒酵母時其體內免疫球蛋白水平升高，可有效降低仔豬腹瀉，改善仔豬生長性能，提高存活率。研究表明，酵母發酵飼料可顯著增加魚腸組織中的杯狀細胞和黏膜細胞數量，改善絨毛的長度和寬度，而對肝臟無任何不利影響。Vidakovic等研究表明，酵母不僅廣泛應用于養殖動物，還可為沙鳥及深海魚類提供蛋白質，作為動物源蛋白質替代物有極高的應用前景。此外，也有報道稱，酵母菌代謝產生的毒素蛋白、有機酸、抗生素因子、乳酸、乙醇等代謝產物有抑菌殺菌作用。

1.3 酵母菌的耐受性及安全性分析

酵母菌制劑在高溫的飼料制粒加工過程中及在胃腸道的胃酸和膽鹽等濃度條件下具有穩定性和耐受性差的缺點。因此，酵母菌抗逆性和安全性應是研究重點。酵母菌耐高溫研究結果表明，在64℃以下水浴2min，酵母菌正常生長；65℃水浴5 min，酵母菌無存活菌落，在59℃水浴10min酵母菌死亡。酵母菌耐膽鹽試驗結果表明，酵母菌活菌數隨膽鹽濃度升高而減少，酵母菌可耐受1%膽鹽濃度，其菌存活率達77%。酵母菌耐酸試驗研究表明，當培養基pH值≤4.5時抑制酵母菌正常生長代謝，進一步降低發酵飼料的品質。

酵母菌制劑相關安全性研究表明，酵母菌制劑為無毒性，臨床使用安全可靠。研究表明，通過采用小白鼠連續14d的飼喂試驗對產朊假絲酵母及其微生態制劑進行安全性分析，結果表明，在表觀水平上，酵母菌及其微生態制劑對小白鼠無毒害作用。

2.乳酸菌

2.1 乳酸菌發酵飼料的作用

乳酸菌一般為厭氧菌，少數為微好氧菌或兼性厭氧菌，在食品、農牧業及醫藥行業中被廣泛應用。乳酸菌可抑制有害菌生長。代謝產生的乳酸物質可抑制吲哚等有害物積累，降低飼料pH值。乳酸菌與纖維素酶共同作用可降低飼料中纖維素含量。發酵飼料可產生動物喜食的香味，改善飼料色澤和質地，提高飼料營養價值。乳酸菌可產生抗真菌代謝產物來抑制真菌生長，并具有吸附和降解真菌毒素的能力。乳酸菌代謝產生的各種消化酶可將生物大分子物質分解為小肽、葡萄糖等更易被消化吸收的小分子物質，還可將乳糖分解為小分子單糖。研究表明，乳酸菌具有完善的蛋白水解系統，有助于復雜蛋白質的水解，以釋放出游離的氨基酸。乳酸菌可維持動物機體的胃腸道菌群平衡，增強機體免疫力，預防疾病發生；可改善飼料風味且提高營養價值，進一步促進飼料在動物機體內的消化吸收；還可抑制動物體內部分毒素的產生，降低膽固醇含量，增強機體健康。乳酸菌應用于青貯飼料中，通過產酸抑制其他雜菌和有害微生物的生長，提高青貯的發酵質量和纖維消化率，減少甲烷排放，從而提高飼糧適口性和營養價值。在青貯飼料發酵過程中，乳酸菌在厭氧條件下消耗可溶性糖，產生的乳酸和乙酸降低飼料pH值，抑制大腸桿菌、霉菌和梭菌等有害菌的生長繁殖，延長發酵飼料的保存期。綜上所述，乳酸菌主要通過自身代謝產生益生性物質和發酵產酸抑制有害菌生長兩方面發揮其益生作用。

2.2 乳酸菌發酵飼料的應用

乳酸菌發酵可提高飼料成分的營養價值。發酵過程中的微生物活動可以部分降解谷物中的抗營養因子，乳酸等發酵代謝產物可通過降低腸道pH值來抑制病原體的增殖。植物乳桿菌通常將單糖發酵為乳酸。乳酸在布氏乳桿菌的作用下分解為乙酸、丙酸和乙醇。因此，植物乳桿菌和布氏乳桿菌混合接種可通過降低pH值來抑制腐敗細菌的生長，且產生的揮發性脂肪酸在發酵穩定性中起重要作用，表現出抗真菌活性，從而改善谷物的發酵質量。研究表明，通過乳桿菌發酵可以降低大豆中抗營養物質的抗營養作用。

在肉食性魚類日糧中，使用植物乳桿菌發酵的豆粕可代替大約45%的魚粉，而不會降低其生長性能和相關的養分利用率。發酵豆粕可通過使過敏蛋白部分水解來減少斷奶仔豬的腹瀉。植物乳桿菌發酵提高絲瓜的體外降低膽汁酸的能力。植物乳桿菌發酵汁可顯著降低大鼠膽固醇含量，將植物乳桿菌用作功能發酵液進行汁液發酵可以發揮微生物控制作用，提高衛生安全性，在預防高膽固醇血癥方面發揮重要作用。研究表明，植物乳桿菌可作為一種特定種類的益生菌菌株在珍珠雞和肉雞的日糧中使用以增強免疫力。斷奶仔豬飼喂發酵小麥籽粒日糧可以刺激后腸發酵，改善營養物質的消化率和腸道健康，從而降低腹瀉率。飼喂副干酪乳桿菌發酵的日糧可提高豬的生長性能，維持胃腸道微生物菌群平衡，增強免疫，改善生長性能。乳酸菌在發酵飼料中具有提高飼料原料營養價值，改善動物生長性能，增強機體免疫功能，增強動物胃腸道健康，改善生態環境等重要作用。

2.3 乳酸菌的耐受性及安全性分析

乳酸菌制劑在高溫、高濕、高壓的飼料制粒加工過程中，及在胃腸道的胃酸和膽鹽等濃度條件下具有不穩定性和耐受性差的缺點。因此，乳酸菌抗逆性是乳酸菌在發酵飼料中的研究熱點。乳酸菌對高溫耐受性的相關研究較少，一般乳酸菌適宜溫度為30~40℃。研究表明，在40℃高溫培養時乳酸菌活性開始降低；植物乳桿菌菌液50℃水浴15min降低其50%有效活菌數量；60℃水浴5min基本無菌生長。研究表明，乳酸菌進入動物胃腸道需經過低于3.0的pH值和高達0.3%的高濃度膽鹽環境，大部分細菌在該條件下因細胞破裂而死亡，利用包埋、包衣等技術或者將乳酸菌制成微膠囊飼喂可有效提高乳酸菌存活率。研究表明，乳酸菌存活率容易受到溫度影響，常溫條件下其活性顯著下降，可用真空冷凍干燥法、制成微膠囊法、真空包裝法和充氮氣包裝法等延長乳酸菌制劑保質期。綜上所述，篩選耐高溫、耐膽鹽和耐酸的乳酸菌對其益生制劑的研發具有重要意義。

大量研究表明，乳酸菌發酵后會產生D-乳酸、亞硝酸鹽、吲哚、溶血素、溶細胞素和腸毒素等毒害代謝產物。飼料工業已認可的益生乳酸菌主要是乳酸桿菌、芽孢桿菌、雙歧桿菌等少數菌種。目前，在乳酸菌易位方面的研究很少，乳酸菌在易位方面主要起著抑制內毒素和病原菌作用，但乳酸菌本身也會發生易位。乳酸菌在機體免疫低下時可能自身會發生易位現象，但具體易位機制目前尚不清楚。隨著新型乳酸菌菌株的分離篩選應用及重組基因工程乳酸菌的出現，其抗性基因的安全性有待研究 。

3.酵母菌和乳酸菌混合發酵的互作機理

混合發酵益生菌旨在利用益生菌之間的不同發酵條件進行互補持續發酵，進而增加飼料中的有益菌數量，提高其營養價值。乳酸菌和酵母菌的混合發酵被廣泛應用于生產微生態制劑，在生產養殖方面具有重要作用。乳酸菌和酵母菌混合發酵時，前期兼性厭氧的酵母菌首先消耗共生環境中的氧氣，為乳酸菌創造有益于其發酵的厭氧環境。在酵母菌發酵耗氧達到乳酸菌發酵的氧氣量時乳酸菌開始增殖發酵且產酸，進而抑制其他雜菌的生長。研究結果表明，乳酸菌在消化道內產酸，抑制致病菌生長 。同時釀酒酵母培養物作為益生菌的前生物，滿足乳酸菌的營養需求，為畜禽生長提供豐富的營養物質及大量的促生長因子，促進畜禽胃腸道有益菌的快速生長。乳酸菌和酵母菌因相互補充和優化生長條件，使其復合制劑應用效果優于單獨添加的作用效果。研究乳酸菌和酵母菌的互生機理對于混合性發酵產品的質量控制、設計開發新型發酵產品和益生產品具有重要意義。

4.酵母菌和乳酸菌復合制劑在發酵飼料中的應用進展

發酵飼料是微生物將植物性原料中的非蛋白氮轉化為營養價值高的菌體蛋白，形成含有豐富益生菌、營養價值高、適口性好且有利于動物吸收利用的無毒害生物飼料。發酵飼料不僅提高動物對飼料的消化吸收率，而且益生菌群在動物體內形成優勢菌群，減少條件致病菌，降低疾病的發生率。發酵飼料可改善肉雞增重和蛋殼硬度，提高飼料轉化率和蛋殼重量，益生作用隨著發酵飼料的添加而增強。動物采食發酵飼料可提高機體免疫反應，減輕氧化應激，改善腸道形態并調節腸道微生物生態系統。生物發酵飼料的研制可解決抗生素殘留等問題。多菌種復合制劑的研發和益生作用潛在機制的研究在畜牧業具有重要意義。

目前，益生菌復合制劑作為無毒、無害、無殘留的安全性動物飼料添加劑在畜牧業已廣泛應用。其中，酵母菌與乳酸菌作為常用的益生菌復合制劑被廣泛應用于畜牧行業。研究報道，產朊假絲酵母和鼠李糖乳桿菌混合菌種發酵可顯著提高發酵原料中的活菌數、總揮發性脂肪酸和粗蛋白等含量，進而降低豬腹瀉率，改善機體健康狀況，提高生長性能。研究表明，酵母菌、芽孢桿菌和乳酸菌混合發酵飼料飼喂幼參，使幼參增重率顯著升高。酵母菌、枯草芽孢桿菌及植物乳桿菌混合發酵可提高全穗玉米中的粗蛋白、乳酸和生物量，顯著降低粗纖維含量，飼喂試驗結果表明，發酵后的全穗玉米可改善豬腸道菌群平衡，增強機體健康，提高生長性能。

乳酸菌和酵母菌混合發酵時具有協同和拮抗作用。通過混合培養研究發現，酵母菌與乳酸菌混合發酵比單一菌種發酵提高各菌數量，各自代謝產物也發生改變，酵母菌代謝產物促進乳酸菌產生更多乳酸，乳酸菌代謝產物抑制酵母菌生長。研究報道，酵母菌和乳酸菌混合發酵馬鈴薯渣、粗蛋白可達35.63%，為菌種混合發酵生產單細胞蛋白相關研究提供依據。酵母菌和乳酸菌混合發酵可穩定乳酸菌活菌數，有利于保存冷藏產品。單菌種和混合菌種在發酵飼料中的研究結果表明，在發酵前期，酵母菌對乳酸菌具有一定的促進作用，而在發酵后期又表現出一定的拮抗作用。酵母菌和乳酸菌在發酵過程中的相互作用既促進又抑制。雖然目前對乳酸菌和酵母菌混合發酵機制還不清晰，但隨著益生菌混合培養的研究和現代分子生物學技術的不斷進步，將會推動益生菌發酵研究快速向前發展。此外，研發酵母菌和乳酸菌制劑必須滿足無毒、無害、無副作用；耐高溫、耐酸、耐堿、耐膽鹽且具有菌群優勢；能產生具有較高活性的酶和乳酸等有益物質；在保存過程中不消耗飼料原料營養物質，保持飼料營養成分和質量。

5.展望

新型益生性酵母菌和乳酸菌品種的篩選工作應放在鑒定新品種對發酵的影響及益生特性研究上，需要從大量不同菌種中篩選完成。益生菌混合發酵中各菌種之間的互作機理和益生菌制劑的研發仍需要進一步探索。